您现在的位置：螺旋藻首页 >> 相关知识 >> 多糖的分离与提纯…

多糖的分离与提纯

作者：易贝尔生物出处：http://www.sd1861.com 时间：2009-9-7

自七十年代起，分子生物学家开始研究多糖，发现一些多糖如海藻酸钠、肝素、真菌多糖等，具有许多重要的生物活性和生理功能，如防护放射损伤、抗肿瘤、抗衰老、抗凝血、抗细菌和病毒感染等。而细胞表面的多糖则具有细胞间通讯识别、信息传递、物质交换与运输、免疫等重要功能。现在多糖的研究范围越来越多，多糖已成为新研究热点。

螺旋藻多糖是从蓝藻类的螺旋藻中分离而得的一种白色粉末状水溶性物质，对人体无毒，具有显著的抗辐射、抗突变功能，可用于防癌、抗衰老，增强机体免疫力等方面。

操作方法

1.热水抽提:取新鲜螺旋藻,水洗后置于反应器中,加入2----3倍量的蒸馆水,加热至 80'C,保温4小时弃去沉淀物,得上清液。

2.真空浓缩:将上清液在7 0 ---- 8 0 ·C温度下减压浓缩至原体积20%左右。若浓缩过度,有时会使多糖与溶剂及杂质混在一起形成大块胶状沉淀,给下一步用酒精沉淀分离杂质带来不便。而浓缩不足,溶液过稀,一方面会在下一步工序中消耗大量有机溶剂,增加生产成本; 另一方面会使多糖沉淀为乳状物,导致分离无法进行。因此,生产前应用少量样品进行试验, 以研究掌握多糖的浓缩方法。

3.酒精沉淀、分离:在浓缩中加入等量或数倍量的95%乙醇,此时螺旋藻多糖以纤维状-.存状沉淀析出,而蛋白质和其它杂质则残留于溶液中。再离心( 400 Orpm , 15四川.去去上亏夜,得沉淀物。

4.脱蛋白质:将沉淀物溶于蒸馆水中,用Sevag法脱蛋白5次,去除氯仿层,得水花层z 芦渭Sevag法,即在水溶液中加入1/5体积的氯仿和1/15体积的异戊醇,振荡10-15h.蛋 l三质与氯仿一异戊醇生成凝胶物,再用离心法或分液漏头分取法分离。 Sevag法是脱蛋白的经典方法,它在避免多糖降解方面有明显的效果,但需反复多次处三才能除净游离蛋白,手续较繁琐,费时且损失样品。如能先加入蛋白酶(如膜蛋白酶或术瓜三白酶等) ,使蛋白质部分降解,再用Sevag法处理,效果会更好。

5.酒精沉淀、分离:所得水相层再次用酒精沉淀、离心(方法同前) ,得胶状沉淀物。

6.沉淀物用1/3体积的丙酣洗涤脱水两次,冷冻干燥,即得灰白色的螺旋藻多糖粗品。

7.粗品再脱蛋白两次(方法同前) ,去除有机溶剂层,得水层。

8.水层再用95%乙醇沉淀,离心分离(方法同前) ,得沉淀物。

9.离子交换柱层析:将沉淀物溶于蒸馅水中,用DEAE-纤维素柱(3. 5cm X 45cm)进行层击,以适宜流速流出,用蒸馆水洗脱,得单一的洗脱峰,减压浓缩(同前)至成为膏状物,冷冻二燥得白色粉末制品。

10.凝胶过滤:将上述制品溶于蒸馆水中,用Sephadex G-200柱(2. 26 X 60cm)进行过宅、水洗,得螺旋藻多糖液体。

11.透析:把糖液置于透析膜中,在蒸馆水中透析48小时以上,除去小分子化合物等杂

12.透析后,再真空浓缩(同上)、冷冻干燥,即可得到精品。

经以上方法处理,所得的螺旋藻多糖是均一的,且不含热原等杂质。

本文由大康螺旋藻编辑出自：螺旋藻相关知识