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标题:品质分析及生化成分的提取
作者:易贝尔生物   出处:www.sd1861.com   时间:2009-8-21

    螺旋藻藻粉中蛋白质、氨基酸、叶绿素、β-胡萝卜素、多糖、粗脂肪、不饱和脂肪酸以及藻蓝素等的含量,可作为藻粉质量的评价指标。

    1、蛋白质含量  一般用凯氏定氮法测定蛋白质含量。氨基酸分析可通过氨基酸自动分析仪测定。

    2、β-胡萝卜素的测定  按GB12389-90纸层析法(中华人民共和国卫生部)测定。溶剂为丙酮—石油醚混合液。石油醚同时是展开剂。

    3、多糖分离提取  螺旋藻多糖(SPS)是从螺旋藻中分离纯化的水溶性多糖。干粉含量6%-7%,提取率为3%。利用多糖溶于酸、碱、盐水溶液或纯水而不溶于醇、醚、酮等有机溶剂的理化特性进行提取。提取时,取藻粉数克,加蒸馏水,于90℃水浴抽提3次,每8小时,离心,合并上清液,常压下70℃水浴中浓缩。用Servage(氯仿4:异戊醇1)方法去蛋白。反复用无水乙醚沉淀。沉淀用蒸馏水溶解后,加入等倍Servage液去蛋白,剧烈振荡,离心,上清夜反复用Servage液处理多次,直到无蛋白质为止。用5倍体积的无水乙醇沉淀,对沉淀物先后用丙酮和无水乙醚脱水得粗多糖。

   将粗多糖溶解在含0.1摩尔/升NaCL的0.001摩尔/升磷酸缓冲液中(PH7.0),使浓度为0.1克/升。然后在DEAE-Sephadex A-25层析柱上以0.5毫升/分的流速洗耳恭听脱。用苯酚-硫酸法跟踪检测,收集含多糖部分,浓缩,对磷酸缓冲液透析、浓缩、冷冻干燥得多糖精品。

    4、藻蓝蛋白的分离  收集的藻细胞经反复冻融、破细胞壁、离心去沉淀,上清液加(NH)4SO4至50%饱和度,沉淀析出蛋白,用两次羟基磷灰石柱,一次Sephadex G-100 (Parmacia)柱分离,得到藻蓝蛋白,用聚丙烯酰胺凝胶电泳检验其纯度。

    5、不饱和脂肪酸组成和含量  取浓缩藻液,加甲醇、氯仿后充分振荡、提取30分钟后加水萃取,以少量氯仿洗上层液体,收集氯仿层,60℃水浴蒸干、称量及进行气相色谱分析不饱和脂肪酸的组成及含量。

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