螺旋藻生长的适应能力强,只要掌握了基本条件, 培养起来较其他藻类容易。一般室内培养单细胞藻类的方法基本上也适用于培养螺旋藻。
1.螺旋藻的培养液组成
自Zarrouk培养液问世以后,螺旋藻大都是以此配方或改良的配方进行培养。Zarrouk培养液营养全面,可较长时间维持螺旋藻的生长,但所需药品种类较多,价格昂贵。配制培养液可以用蒸馆水或自来水(经煮沸消毒后 使用)。加入营养元素应以一定顺序,如先加入氮,再加磷,最后力口铁等其他成分O每加入一种营养物,应使 其溶解后,搅拌均匀,再加入第二种。对于含量很少的营养成分,可预先配制成浓度大的母液,每次使用时吸 取少许加入即可,这样可省去每次称量的麻烦。
2.培养容器及消毒方法
室内培养螺旋藻可以用各种不同大小的三角瓶,容量可以从100毫升到2000 毫升,或用其他较大的容器,如玻璃缸、塑料罐或盆等。培养容器、工具的消毒可以采用加热消毒或化学药 剂消毒(大容器)。加热消毒可以直接将培养容器置电 炉上(只限于三角烧瓶)或把容器一起放大锅中,加水 煮沸5~10分钟。也可以用烘干箱干燥消毒,将容器洗净后沥干,放入烘干箱内加热到120℃时,停止加热, 冷却后取出使用。化学药剂一般用0.01 % ~ 0.0.2 %高锰酸钾溶液或10~15毫克/千克有效氯的漂白粉消毒。
3.培养方法
当培养液配好,容器消毒灭菌后, 即可接种或扩大培养。接种后培养液的量可以是原来的 3~10倍。瓶口用消毒过的纱布或纸张(滤纸或牛皮纸)包好,放在适宜的光照和温度条件下培养。刚接种 或当培养液比较稀疏时,宜置于弱光下培养。 在培养过程中要经常搅拌培养液。搅拌对螺旋藻的生长繁殖有益,可使培养液中的气体和营养成分得以充分交换,藻丝不易结块或下沉。搅拌的方式有几种。一 是可直接摇动三角瓶,每天几次。二是通气培养,通入 空气或含一定浓度的~气体。此外,还可在摇床上培养(往复式摇床) ,这种培养方式一次可以培养许多瓶,省去手摇的麻烦。
螺旋藻培养时可见藻液呈蓝绿色,密度小时呈淡绿色,肉眼可见细小的藻丝。当环境条件不利或衰亡时, 藻丝发生解体,失去螺旋形,色泽变黄、变白,或在培 养液中密集成黄、白、淡红色絮状小块沉于底部。钝顶螺旋藻和极大螺旋藻在培养时成不同的状态,前者常密集在一起,相互缠绕成团块状或絮状悬于或沉于容器的底部,后者藻丝较大,细胞中气泡很多,常悬浮于培养 液中,分散生长,不相互缠绕在一起。
4.螺旋藻生长的测定和藻体的收集
螺旋藻在培养过程中的生长状况或速度可以用几种方法来测定,目前常用的有以下几种: (1)光密度法 这是最常用、也是最简便的一种方法。当培养的藻类生长迅速、藻细胞数目增加时,藻液 颜色由浅变深。因此可以用分光光度计来测定光密度值来表示生长状况。测定时试样要充分摇匀,在560纳米波长下测光密度值。通常每天测一次,每次重复3~5遍,取平均值。 (2)细胞记数 用计数框或视野法直接在显微镜下计算藻细胞(藻丝)数目。 (3)光合作用 培养的藻类生长速-度加快时,光合 作用增强,培养液中溶解氧的含量也随之增加,因此溶 解氧的变化反应了藻类生长的状况。溶解氧可用测氧仪 测得,每天一次。(4)干重法 测定接种时藻体生物量(克/升) , 经过t时间后,再测定藻体生物量。测定时将收集的藻体用蒸馆水洗2~3次,然后放 入已恒重的称量瓶中,置80t恒温箱中烘干至恒重, 最后称重求出藻体的干重。(5)叶绿素含量 藻体中叶绿素含量与光合作用有关,当生长迅速时,叶绿素含量增加,加强了光合作用。螺旋藻的叶绿素只有叶绿素a,叶绿素a的含量可 用分光光度法测定。
当螺旋藻接种后8~14天,藻液变得浓绿,光密度 值在1.0以上时即可收集藻体。用300~400目的筛绢 过滤收集,并用清水冲清数次,得到藻泥。根据不同的 测试,需要做不同处理。测定蛋白质、多糖等可在烘干 箱中(温度37 ~ 55t)烘干;测定不耐高温的活性成 分,如不饱和脂肪酸等,需用真空或冷冻干燥,以保证原有的活性成分不变O收集后的滤液及其中的一些细小 的藻丝可重新利用培养。
5.保种培养
螺旋藻的保种可采用固体培养和液 体培养两种方法。固体保种培养是用斜面琼脂来培养的。试管斜面琼脂(或三角瓶斜面琼脂)是用2%琼脂 加培养液现配制而成。培养是无菌培养。因此,培养基、用具等须经高压灭菌消毒后,按无菌操作接种O接 种后置于室内散射光环境中培养,一般隔30~60天重 新接种,作继代培养。
液体保种培养是在三角瓶中加入培养液,接种培 养。置散射光(弱光)处,每天摇动2~4次,每隔一段时煎接入新鲜培养液中或加入培养液继代培养。一般保种采用营养齐全飞高浓度碳酸氢纳的Zarsouk氏培养基,可维持螺旋藻较长时间的生长。
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废水、废弃物养殖螺旋藻的意义…
螺旋藻属于光合自养生物，但它还具有利用有机物中碳、氮、磷等进行混合营养能力。废水和废弃物，包括生活污水、食品加工废水、牲畜等农业废水以及一些工厂的废水，往往含有
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生长条件…
1、高碱环境与盐度
高碱与适度盐分是螺旋藻重要的生长条件，螺旋藻生活的高碱湖里矿质盐达到30克/升。水域的pH在10-11时，螺旋藻属的种类成为优势种群。螺旋藻对石性环境有较强的适应能力，适宜的