钝顶螺旋藻多糖,经我们多年研究,发现它是一种无细胞毒的天然物质,分子量为12590,具有增强小鼠骨髓细胞增殖能力的特性,还能显著减轻小鼠骨髓细胞和蚕豆根尖细胞的辐射遗传损伤,大大降低电离辐射引起的突变频率。此外它有提高核酸内切酶活性和促进DNA修复合成的作用。并对体内移植性癌细胞的增殖有明显的抑制作用。为了进一步控讨螺旋藻多糖的生物活性及其作用机理,本文控讨了螺旋藻多糖对机体免疫功能的提高作用及其机理。
实验材料
螺旋藻多糖按文献方法提取与纯化,用80℃无菌水配成所需浓度,置冰箱备用。
实验动物:N1H小鼠由兰州生物制品研究所提供,昆明系小鼠由广州中医学院动物繁殖场供应。
环磷酰胺:上海第十二制药厂,批号880309。
鸡红细胞:取本校饲养场的公鸡红血球在4℃冰箱保存于Alsever氏液中,临用时用无菌生理盐水离心洗3次,配成5%的悬液。
补体的制备:取2只豚鼠血清混合,用无菌生理盐水配成10%备用。
标记物:亮氨酸(3H-Leu比强度2.96TBQ/mmol),上海原子核研究所产品。
消化剂:过氯酸和过氧化氢容量比1:1。
闪烁液:0.4%PPO和0.01%POPOP的二甲苯深液与乙二醇甲醚6:4(V:V)。
实验方法
腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定
将健康N1H小鼠随机分成4组,每组18只,实验组分别按150,200和300mg/kg的螺旋藻多糖,每天腹腔注射一次,连续6D,取巨噬细胞前48h每鼠腹腔注射0.4%的糖原(动物淀粉)1ml,取巨噬细胞前1h,每鼠腹腔注射5%的鸡红细胞0.5ml,1h后处死小鼠取腹腔液涂片、干燥、固定。经giemsa-wright氏染液染色后镜检计数(每鼠涂片3张,每片最少计数100个细胞)然后分组统计比较各实验组与对照组的巨噬细胞的平均吞噬率与吞噬批数。
T淋巴细胞用酯酶活性检测法测定
选健康昆明种雄性18-20g小鼠80只,随机分组,每组10只共8组,灌胃法与注射法各组。
对照组:藻胃法,每天灌蒸馏水0.5ml/只,并腹腔注射生理盐水0.2ml/只;注射法则每天每只腹腔注射生理盐水0.2ml/只。
螺旋藻多糖组:灌胃法,每天灌螺旋藻多糖0.5mL/只(相当1g/kg体重) ,并腹腔注射生理盐水0.2mL/只;注射法的则每天每只腹腔注射螺旋藻多糖300 mg/kg。
环磷酰胶组:灌胃法,每天灌蒸馏水0.5mL/只,并腹腔注射环磷酸胺10mg/kg;注射法则每天每只腹腔注射环磷航胶10mg/kg。
螺旋藻多糖加环磷酰胺组:灌胃法,每天每只灌螺旋藻多糖19/kg (0.5mL/只),并腹腔注射环磷酸胶10mg/kg;注射法的则每天每只腹腔注射螺旋藻多糖300mg/kg,环磷酸胶 10mg/kg。上述四组处理均连续10d。停药后第2天,分组逐只取小鼠外周血进行酸性α-醋酸 荼醋酶(ANAE)阳性淋巴细胞百分率检测。
血清溶血素的测定
用鸡红细胞作免疫原的方法测定,选健康18~21g NIH小鼠50只,每鼠腹腔注射5%的鸡红细胞0.2mL进行免疫。免疫后第2天,实验组按150,200和300mg/kg剂量分别注射螺旋藻多糖,每天一次连续6d,对照组注射相应的生理盐水。第7天眼球后静脉取血,离心, 取血清用生理盐水稀释100倍。取上述稀释血清1mL与5%鸡红细胞悬液0.5mL混合,在冰浴中加10%补体0.5ml。37℃恒温箱内保温30min后在冰浴中停止反应。离心,取上清液置721分光光度计540nm处比色,测光密度。另设不加血清的空白组对照,比较实验组与对照组的平均光密度。
血清蛋白生物合成的测定
选健康14~16g昆明小鼠60只,随机分成5组:实验组分别按150和300mg/kg的螺旋藻多糖溶液,每天腹腔注射1次连续5d,最后1次为皮下注射。另一组为连续自饮0.2%的螺旋藻多糖溶液5d,对照组分别注射相应的生理盐水或自来水。在标记前禁食16h,但饮水不限,最后一次给药后1h,每鼠腹腔射3H-Leu O. 2mL(相当O. 1μci/g) ,4h后眼球后静脉取血,在室温下自然凝血4h后离心分离血清,取血清0.2mL加10%三氯醋酸4mL洗2次,以沉淀蛋白质并除去游离的3H-Leu及其他小分子,离心后再用1 : 1的乙醇乙酷混合液洗1 次,以除去三氯醋酸和酶类物质,加0.05mL消化液在80℃消化30min,用10mL闪烁液分3 次将消化物全部移入测量瓶中加盖过液置FJ-2100型自动液体闪烁仪测量放射性,以1mL 血清内含血清蛋白计算,比较实验组与对照组的平均cpm值。
胸腺皮质厚度与脾脏红髓内巨噬细胞数
用定量组织学方法进行观察,此实验的分组与处理和T淋巴细胞酶酶活性检测试验相同。
结果
螺旋藻多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的促进作用
结果显示:腹腔注射150,200和300mg/kg的螺旋藻多糖均能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数,其作用随剂量增大而升高。
螺旋藻多糖对小鼠T淋巴细胞的影响
无论藻胃或注射螺旋藻多糖,均能显著提高小鼠T淋巴细胞的百分数,免疫抑制剂(环磷酰胺)明显减少T淋巴细胞的百分数,螺旋藻多糖可以消除环磷酰胺的抑制作用。
螺旋藻多糖对小鼠血清溶血素的影响
结果:螺旋藻多糖能显著提高小鼠血清溶血素的含量,同时,亦随剂量多而升高。
螺旋藻多糖对小鼠胸腺皮质厚度与脾脏红髓内巨噬细胞的影响:结果无论灌胃或注射,螺旋藻多糖均能明显使小鼠胸腺皮质厚度增加和使脾脏红髓内的巨噬细胞增多。而免疫抑制剂环磷酰胺则使胸腺皮质厚度变薄,使脾脏红髓内巨噬细胞减少,螺旋藻多糖可消除或减轻环磷酰胺的抑制作用。
螺旋藻多糖对小鼠血清蛋白生物合成促进作用
结果:腹腔注射或自然饮用螺旋藻多糖均能明显促进小鼠血清蛋白的生物合成。
讨论:
灌胃或腹腔注射螺旋藻多糖,均能提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数,说明其多糖大大促进了巨噬细胞的吞噬活性,这与真菌多糖和黄芪、红芪多糖相似的作用,螺旋藻多糖还能提高小鼠外周血中T淋巴细胞的百分数和血清溶血素的含量。显示螺旋藻多糖不但能提高机体非特异性的细胞免疫功能,而且能促进机体特异性的体液免疫功能。螺旋藻多糖能增大小鼠骨髓中多染红细胞与正染红细胞的比值(PCE/NCE),即增强了骨髓细胞的增殖活力,有利于巨噬细胞、T细胞和B细胞等免疫效应细胞的形成。胸腺在维持机体免疫功能方面起着重要的作用,螺旋藻多糖促使胸腺皮质厚度增加,便有效地促进了T淋巴细胞的发育生成,并进入淋巴管和外周血而发挥细胞免疫功能。螺旋藻多糖促进血清蛋白的生物合成的特性,与银耳等多糖的作用一致,这对血清溶血素(特异性抗体)含量的增加是有利的。因此,螺旋藻多糖对机体免疫功能的提高作用与其能增强骨髓细胞的增殖活力,促进胸腺、脾脏等免疫器的生长和促进血清蛋的生物合成有关,同时还与其能消除或减轻环磷酰胺这类免疫抑制剂对机体免疫系统的抑制作用有关。
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微藻和微藻产品…目前,已经或正在形成生产规模和即将投放市场的微藻种类主要有:蓝藻中的螺旋藻和钱腥藻;绿藻中的小球藻、盐藻、栅藻和红球藻;以及硅藻、金藻和隐藻中直接作为贝、虾等珍贵水产品的育苗饵料的一些藻类。
微藻
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从海水螺旋藻中开发食用天然色素…以前有一篇新闻以如下:
海水螺旋藻大规模商业化养殖成功是我国藻类界在“七·五”、“八·五”期间取得的重要成果之一,在此基础上,本文报道以海水螺旋藻为原料,提取得到食用天然色素藻蓝(系水),该品已作